Under operasjon for hjernesvulst foretas ofte frysesnittundersøkelse. Vev fra svulst fryses da ned i isopentan og det skjæres frysesnitt som farges med hematoxylin-erytrosin (eller hematoxylin-eosin). Frysesnitt gir mulighet for foreløpig diagnose under operasjonen og er især indisert der svaret på frysesnittet kan ha betydning for det videre kirurgiske inngrepet. En frysesnittdiagnose er i alle tilfeller å regne som en foreløpig diagnose der undersøkelse av formalinfiksert restmateriale må avventes før endelig diagnose stilles. Dersom det er praktisk mulig beholdes restmaterialet nedfrosset ved –80°C i diagnostisk biobank for eventuelle senere molekylærpatologiske undersøkelser.
Hovedpreparatet fikseres i formalin og innstøpes deretter i parafin. Dette vevet brukes til histologiske farginger, immunhistokjemiske undersøkelser, og molekylærgenetiske undersøkelser som for eksempel MLPA, PCR, pyrosekvensering, NGS og FISH.
For å stille en integrert diagnose må patologen vurdere tumors morfologi ved lysmikroskopi, resultatet av immunhistokjemiske farginger, og molekylærpatologiske funn. Svulstene klassifiseres etter CNS-WHO 2021.
Aktuelle immunhistokjemiske undersøkelser for nevroepiteliale svulster
Aktuelle immunhistokjemiske undersøkelser ved nevroepiteliale svulster er:
GFAP – nyttig for å skille gliomer fra andre svulster
Ki67 – proliferasjonsmarkør
P53 – positiv i mange diffust infiltrerende astrocytomer
IDH1 – ved alle diffust infiltrerende gliomer (se 11.5.3)
ATRX – tapt kjernefarge i IDH-positiv svulst er diagnostisk for diffust astrocytom
H3 K27M – ofte positiv i midtlinjegliomer
EMA – ofte positiv i ependymomer
P65 – ofte positiv i RELA-positive ependymomer
H3K27(28)me 3 - screening for tap av trimetylering av aminosyren Lysine i posisjon 28 (27) på H3. Aktuelt i diagnostikk av diffust midtlinjegliom, H3K27-alterert
Aktuelle immunhistokjemiske undersøkelser for meningeomer
Aktuelle immunhistokjemiske undersøkelser ved meningeomer er:
EMA – skille meningeom fra solitær fibrøs tumor (sammen med stat-6, CD34, S100, PGR)
Ki67 – finne områder med mest mitoser
Aktuelle immunhistokjemiske undersøkelser ved hjernemetastaser
Aktuelle immunhistokjemiske undersøkelser ved hjernemetastaser er:
Cytokeratiner – positive i karsinomer (ulike cytokeratoner kan differensiere mellom ulike karsinomtyper)
TTF-1 – tyder på metastase fra lungekarsinom
Napsin A – tyder på metastase fra lungekarsinom
AP-15 – tyder på metastase fra mammakarsinom
CDX2 – tyder på metastase fra adenocarinom i gastrointestinaltraktus
S100 – tyder på metastase fra malignt melanom
MelanA – tyder på metastase fra malignt melanom
HMB-45 – tyder på metastase fra malignt melanom
En rekke andre immunfarginger kan være aktuelle for å finne mulig origo til carcinommetastaser. Det henvises til spesiallitteraturen (Pekmezci et al., 2013).
Anbefalinger:
- Svulster i sentralnervesystemet klassifiseres etter WHOs retningslinjer av 2021
- Immunhistokjemisk farging for IDH1R132H og H3 pK28me3 gjøres på alle diffust infiltrerende gliomer
- Ved negativ immunhistokjemi gjøres utvidet molekylærgenetisk analyse på IDH1 kodon 132 og IDH2 kodon 172 ved MLPA og/eller sekvensering. Ved negativ MLPA bør det gjøres sekvensering for IDH
- Ved påvist tap av H3 p.K28me3-uttrykk gjøres utvidet molekylærgenetisk analyse på H3
- Ved glioblastomer hos pasienter eldre enn 54 år med bevart ATRX og H3p.K28me3, uten mistanke om tidligere diffust CNS WHO grad 2 gliom, kan man vurdere å utelate utvidet molekylærgenetisk analyse ved negativ IDH immunhistokjemisk farging (da de fleste glioblastomer i denne aldersgruppen er IDH-villtype)
- ATRX immunfarging gjøres på alle diffust infiltrerende gliomer
- Alle IDH muterte astrocytomer histologisk grad 2 og 3 skal testes for homozygot delesjon CDKN2A/B for å utelukke molekylærgenetisk grad 4 tumores
- 1p/19q-status undersøkes hos alle pasienter med påvist IDH-mutasjon
- I tilfeller med klassisk morfologi forenlig med astrocytom og tap av ATRX (og/eller nukleær p53-akkumulasjon) kan man vurdere å utelate analyse av 1p19q-status
- Molekylærpatologisk undersøkelse for MGMT-promotormetylering gjøres på alle grad 4 tumores