Mismatch reparasjonsproteiner (MMR)
Undersøkelse på uttrykk av de fire reparasjonsproteinene MLH1, PMS-2, MSH-2 og MSH-6. Omtales som «proficient» om alle uttrykkes (pMMR), og som «deficient» (dMMR) om en eller flere ikke uttrykkes. For best resultat bør dette gjøres på biopsimaterialet.
Preparater fiksert ved bruk av GEWF får ofte svak, ujevn eller inkonklusiv fargning med MMR-proteiner. Følgelig anbefales MSI-status avklart enten immunhistokjemisk med MMR-proteiner på biopsimateriale (som er fiksert på vanlig formalin) eller PCR på operasjonsmateriale. Lang fikseringstid på formalin (særlig på resektater) forringer også ofte uttrykk av immunmarkørene.
Prevalensen av dMMR/MSI i adenokarsinomer i tykk- og endetarm oppgis til å være rundt 10-15 % (Abrha et al., 2020; Sinicrope et al., 2012), men adenokarsinomene i rektum utgjør kun omtrent 3 % (Papke et al., 2022).
PD-L1
Testing med tanke på uttrykk av PD-L1 har foreløpig ingen plass i utredningen om immunterapi hos pasienter med utbredt tykk- og endetarmskreft ettersom denne behandlingen vurderes på bakgrunn av dMMR.
BRAF
De aller fleste mutasjonene i BRAF (90 %) er resultat av substitusjon av valin med glutaminsyre (V600E). Denne mutasjonen kan man detektere ved hjelp av immunhistokjemi.
HER2
Ved scoring av HER2 anbefaler ESMO (Van Cutsem et al., 2014) at man benytter «Heracles diagnostic criteria» (Valtorta et al., 2015), se tabell under. Denne studien har benyttet VENTANATM4B5 immunhistokjemi, da de fant at det ga bedre samsvar med ISH sammenlignet med Dako sin HercepTest metode (Valtorta et al.). En kan således ikke automatisk implementere resultat fra andre kloner til Heracles diagnostic criteria. Andre studier har ikke tatt hensyn til kit for HER2 ved inklusjon for behandling (Hagemann et al., 2023; Meric-Bernstam et al., 2019). Det kan også foreligge funn ved NGS som kan indikere amplifikasjon, og funn bør da ev. verifiseres ved ISH, selv om det ikke alltid er samsvar (81% konkordans) (Meric-Bernstam et al., 2019). Det foreligger ikke nyere valideringstudier i tykk- og endetarmskreft hvor man har sammenlignet ulike kloner av HER2, men studier hos brystkreftpasienter og endometriekarsinomer indikerer at HercepTestTM aAB har bra samsvar med VentanaTM4B5 (Navarro Sanchez et al., 2024; Rüschoff et al., 2022). Dersom laboratoriet har andre kloner enn 4B5 som er validert i de enkelte laboratoriene, så kan de også benyttes. FISH eller SISH kan også benyttes for scoring, og en bør ha lav terskel for testing med ISH om en er i tvil om ved immunhistokjemisk tolkning.
For tolkningen av SISH kan man benytte Royal College of Pathologists sine anbefalinger («HER2 in colorectal cancer: guidance for pathologists receiving requests for testing») (PDF, rcpath.org). Oppsummert bør 20 ikke-overlappende tumorceller vurderes for å regne ut HER2(sorte signaler)/kromosom 17(røde signaler)-ratio, der ratio < 2,0 ikke er amplifisert, mens ratio ≥ 2,0 er amplifisert. Prøver med ratio 1,8-2,2 bør retelles. Hvis borderline (1,8-1,99) vurderes antall sorte signaler (HER2) per celle. <4 kopier er negative, ≥6 kopier er positive mens 4-6 er «borderline ikke amplifisert».
Skåring av HER2
| Immunhistokjemisk farging | Immunhistokjemisk uttrykk | Immunhistokjemisk klassifisering |
|---|---|---|
| Ingen farging |
| Negativ |
Svak farging (1+) uansett hvor mange celler | Segmentell eller granulær | Negativ |
Moderat (2+) i <50 % av cellene | Hvilket som helst fargemønster | Negativ |
Moderat (2+) i >50 % av cellene | Membranøs farging, basolateral eller lateral | Usikker – gjenta IHK. Til FISH/SISH om fortsatt >50 % |
Intens (3+) i ≤10 % av cellene | Membranøs, basolateral eller lateral | Negativ |
Intens (3+) i >10 % av cellene | Membranøs, basolateral eller lateral | Positiv |
NTRK
Sjeldent forekommende fusjon i tykk- og endetarmskreft (<0,5 %), men oftere hos de som er dMMR (6-16 %). Kan detekteres ved immunhistokjemi, med må bekreftes ved NGS (Cervantes et al., 2023).